අණුක ජීව විද්යාත්මක පර්යේෂණ ක්රම හා ඔවුන්ගේ භාවිතය

අණුක ජීව විද්යාත්මක පර්යේෂණ ක්රම නවීන වෛද්ය විද්යාව, වෛද්ය විද්යාව, ජීව විද්යාව හා වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කරනවා. DNA හා RNA අධ්යයනය අත්තිකාරම් ස්තුති, පුද්ගලයා, ආදිය අම්ල මිශ්රණයක් අපේක්ෂිත නියුක්ලික් අම්ල හඳුනා ගැනීමට, එම රෝග කාරකය තීරණය වන ජීවීන්ගේ ජෙනෝමය ගවේෂණය කිරීමට හැකි

අණුක-ජීව විද්යාත්මක ක්රම. එය කුමක්ද?

නැවත විද්යාඥයන්ගේ 70-80s දී දැමීමට සිදු වූ ප්රථම මිනිස් ජාන. මෙම අවස්ථාවට ජාන ඉංජිනේරු හා අණුක ජීව විද්යාව සංවර්ධනය ආවේශය. ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ ගුණ සහ RNA වල අධ්යයනය රෝග නිර්ණය, අධ්යයනය ජාන කිරීමේ අරමුණ සඳහා මෙම න්යෂ්ටික අම්ල භාවිතා කිරීමට දැන් හැකි බව අදහස් කර ඇත.

DNA හා RNA සකස්

අණුක ජීව විද්යාත්මක රෝග විනිශ්චය ක්රම බොහෝ විට මෙම: ද්රව්ය ආරම්භ අවශ්ය න්යෂ්ටික අම්ලය. ජීවීන්ගේ සෛල වල සිට මෙම ද්රව්යයන් තෝරා ගැනීමට ක්රම කිහිපයක් ඇත. එක් එක් එහි වාසි සහ අවාසි ද ඇත, සහ නිර්මල, නියුක්ලෙයික් අම්ල හුදකලා කිරීමේ ක්රමයක් තෝරා විට එය සලකා බැලිය යුතුය.

Marmur විසින් ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ 1. සකස් කිරීම. මෙම ක්රමය, මත්පැන් ද්රව්ය මිශ්රණයක් ප්රතිකාර සමන්විත පිරිසිදු ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ ප්රතිඵලයක් precipitates. මෙම ක්රමය එහි අවාසිය විඛාදන දව phenol හා ක්ලෝරෝෆෝම් භාවිතයයි.

මෙම බුබුල මත, ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ 2. ඒකලනය. මෙහිදී පාවිච්චි කෙරෙන බව ප්රධාන ද්රව්යය - guanidine thiocyanate (GuSCN) වේ. එය තැන්පත් ප්රවර්ධනය deoxyribonucleic අම්ලය එය පසුව විශේෂ බෆරය මාර්ගයෙන් එකතු ගත හැකි විශේෂිත උපස්ථර මත. කෙසේ වෙතත් GuSCN - මෙම TCP ක inhibitor වන අතර, ඒ කුඩා කොටසක් පවා ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ තැන්පත් වී යයි, නියුක්ලෙයික් අම්ල සමඟ වැඩ කරන විට ඉතා වැදගත් වන පොලිමරේස් දාම ප්රතික්රියා, පාඨමාලාව බලපෑම් කළ හැකිය.

3. අශුද්ධ ද්රව්ය වර්ෂාපතනය. මෙම ක්රමය අණු තමන් dehoksiribonukleinovoy අම්ලය හා අපද්රව්ය තැන්පත් වී නොමැති බව තුළ පෙර අය වෙනස් ය. මේ සඳහා, අයන හුවමාරු භාවිතා කරන්න. අවාසිය සියලු ද්රව්ය නොවන පදිංචි හැකි බව ය.

4. ජනමාධ්ය තිරගත. ඔබ DNA අණුවේ ව්යුහය, සමහර සංඛ්යා ලේඛන ලබා ගැනීම සඳහා අවශ්යතාව ගැන නිවැරදි තොරතුරු අපට අවශ්ය නැත විට මෙම ක්රමය අවස්ථාවල දී භාවිතා වේ. හේතුව ක්ෂාලක, විශේෂයෙන් alkalies ඇඳිය නියුක්ලෙයික් අම්ල ව්යුහය හානි කළ හැකි බව ය.

පර්යේෂණ ක්රම වර්ගීකරණය

පර්යේෂණ සියලු අණුක-ජීව විද්යාත්මක ක්රම ප්රධාන කාණ්ඩ තුනකට බෙදා ඇත:

1. විස්තාරණය (එන්සයිම බහුත්වයක් භාවිතා කරමින්). මෙම රෝග විනිශ්චය ක්රම බොහෝ වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි වන පොලිමරේස් දාම ප්රතික්රියා, - මෙම PCR ඇතුළත් වේ.

2. Neamplifikatsionnye. ක්රම මෙම කණ්ඩායම නියුක්ලික් අම්ල මිශණ වැඩ සමග සෘජුව සම්බන්ධ වී ඇත. උදාහරණ 3 වර්ගයේ blots වන අතර, ස්ථානයෙන් බැහැර දෙමුහුන් කිරිමේ දී, ආදිය

3. විශේෂිත DNA හෝ RNA රජයෙන් පොදුයි වන පරීක්ෂණ අණුවක්, සිට සංඥා පිලිගැනීම මත පදනම් ක්රම. නිදසුන - දෙමුහුන් කිරිමේ පද්ධතිය Hybride රූප ක්රමය විසඳුමක් (hc2).

අණුක ජීව විද්යාත්මක පර්යේෂණ ක්රම භාවිතා කළ හැකි බව එන්සයිම

බොහෝ අණුක ප්රතික්රියා තාක්ෂණය එන්සයිම පුළුල් පරාසයක භාවිතය සම්බන්ධ වේ. පහත බොහෝ විට භාවිතා වේ:

1. සීමා එන්සයිමය - අවශ්ය අමතර කොටස් සඳහා ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ අණුවක් "කපා".

2. DNA පොලිමරේස් - ද්විත්ව රැහැනක deoxyribonucleic අම්ලය අණුවක් සංශ්ලේෂණය.

3. ප්රතිවිකුණුම් transcriptase (transcriptase ආපසු හැරවීමට) - ආර්.එන්.ඒ සැකිල්ල සිට DNA සංස්ෙල්ෂණය කිරීම සඳහා යොදා ගනී.

4. ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ ligase - නියුක්ලියෝටයිඩ අතර phosphodiester බැඳුම්කර පිහිටුවීම සඳහා වගකිව යුතු වේ.

5. exonuclease - මෙම deoxyribonucleic අම්ලය අණුවක් අවසන් කොටස් සිට නියුක්ලියෝටයිඩ ඉවත් කරයි.

PCR - ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ විස්තාරණය මූලික ක්රමය

පොලිමරේස් දාම ප්රතික්රියා (PCR) නවීන අණුක ජීව විද්යාවේ බහුලව භාවිතා වේ. මෙම ක්රමය, තනි අණුවක් පිටපත් විශාල සංඛ්යාවක් (වර්ධකයක් අණුවක්) ලබා ගත හැකි ය.

PCR ප්රධාන කාර්යයන්:

- රෝග විනිශ්චය,

- ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ අංශ උත්සහය, ජීන්.

මූලික අණුවක්, එය thermostable DNA පොලිමරේස් (Taq හෝ Pfu), deoxyribonucleotide පොස්පේට් (නයිට්රජන් කඳවුරු ආරංචි මාර්ග), එම මුල් ආලේප (2 පාථමිකය 1 DNA අණුව) සහ ම සිදු කරනු ලබන ආරක්ෂණ පද්ධතිය: මෙම පොලිමරේස් දාම ප්රතික්රියා සිදු කිරීමට පහත සඳහන් මූලිකාංග අවශ්ය සියලු ප්රතික්රියා.

denaturation, පාථමිකය annealing හා දික්: PCR පියවර තුනකින් සමන්විත වේ.

1. denaturation. අංශක 94-95 ක උෂ්ණත්වයේ දී සෙල්සියස් අංශක, ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ චේන් දෙක අතර හයිඩ්රජන් බන්ධන බිඳ proshodit වන අතර මෙහි ප්රතිඵලයක් ලෙස අපි තනි අතරමං අණු දෙකක් ලබා ගන්න.

2. මුල් ආලේප ෙමෙළඟු. අංශක 50-60 ක උෂ්ණත්වයේ දී සෙන්ටිග්රේඩ් අනුපූරකතාවය වර්ගය අනුව එක් රැහැනක නියුක්ලික් අම්ල අණු සීමාන්තවල දී පෙව්ශය මුල් ආලේප සිදුවේ.

3. දිග්ගැනීම. අංශක 72 ක උෂ්ණත්වයේ දී දියණිය ද්විත්ව අතරමං deoxyribonucleic ආම්ලික අණු සංස්ලේෂණය කර ඇත.

ප්රජාතන්ත්රවාදී ජාතික සන්ධානයේ අනුකමණය

අණුක ජීව විද්යාත්මක පර්යේෂණ ක්රම බොහෝ විට deoxyribonucleic අම්ලය අණුවක් තුළ නියුක්ලියෝටයිඩ අනුක්රමය පිළිබඳ දැනුම අවශ්ය වේ. තීරණය කිරීම සඳහා කළ ප්රවේණි කේතය අනුකමණය. අනාගත අණුක රෝග විනිශ්චය මානව අනුක්රමයේ අධිෂ්ඨානය ලබා ගන්නා දැනුම මත පදනම් වනු ඇත.

අනුකමණය පහත දැක්වෙන ආකාරයේ:

• මෙම Maxam-ගිල්බට් විසින් අනුකමණය;
• සැන්ගර් අනුකමණය;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe අනුකමණය.